V biologickom výskume sa zvyčajne používajú polypeptidy s dlhou sekvenciou.Pre peptidy s viac ako 60 aminokyselinami v sekvencii sa na ich získanie všeobecne používa génová expresia a SDS-PAGE.Tento spôsob však trvá dlho a konečný efekt separácie produktu nie je dobrý.
Výzvy a riešenia pre dlhú syntézu peptidov
Pri syntéze dlhých peptidov sa vždy stretávame s problémom, to znamená, že stérická zábrana kondenzačnej reakcie sa zvyšuje so zvyšujúcou sa sekvenciou v syntéze a je potrebné upraviť reakčný čas, aby bola reakcia úplná.Avšak čím dlhší je reakčný čas, tým viac vedľajších účinkov vzniká a tvorí sa časť cieľového peptidu.Takéto zvyšky – deficitné peptidové reťazce sú kľúčovými nečistotami vznikajúcimi pri syntéze dlhých peptidov.Preto pri syntéze dlhého peptidu je kľúčovým problémom, ktorý musíme prekonať, preskúmať vysokokvalitné reakčné podmienky a reakčné metódy, aby bola kondenzačná reakcia aminokyselín komplexnejšia a plnohodnotnejšia.Okrem toho znížte reakčný čas, pretože čím dlhší je reakčný čas, tým viac nekontrolovateľných vedľajších reakcií, tým komplexnejšie sú vedľajšie produkty.Preto sú zhrnuté tieto tri body:
Mikrovlnnú syntézu možno použiť: Pre niektoré aminokyseliny vyskytujúce sa v procese syntézy, ktoré nie je ľahké integrovať, možno použiť mikrovlnnú syntézu.Táto metóda má pozoruhodné výsledky a výrazne znižuje reakčný čas a znižuje tvorbu dvoch kľúčových vedľajších produktov.
Môže sa použiť metóda syntézy fragmentov: Keď sa niektoré peptidy ťažko syntetizujú bežnými metódami syntézy a nie je ľahké ich purifikovať, môžeme prijať celú kondenzáciu niekoľkých aminokyselín v určitom segmente peptidu do peptidového reťazca ako celku.Táto metóda môže tiež vyriešiť veľa problémov v syntéze.
Môže sa použiť syntéza acylhydrazidov: acylhydrazidová syntéza peptidov je metóda syntézy N-koncového Cys peptidu a C-koncového polypeptidového hydrazidu na pevnej fáze chemická selektívna reakcia medzi tvorbou amidových väzieb na dosiahnutie peptidovej väzby.Na základe polohy Cys v peptidovom reťazci táto metóda rozdeľuje celý peptidový reťazec na viacero sekvencií a syntetizuje ich v tomto poradí.Nakoniec sa cieľový peptid získa kondenzačnou reakciou v kvapalnej fáze.Táto metóda nielen výrazne znižuje čas syntézy dlhého peptidu, ale tiež výrazne zvyšuje čistotu konečného produktu.
Dlhé čistenie peptidov
Špecifickosť dlhých peptidov nevyhnutne vedie ku komplexným zložkám surových peptidov.Preto je tiež výzvou čistiť dlhé peptidy pomocou HPLC.amyloidná séria procesu čistenia polypeptidov, ktorá absorbuje veľa skúseností a úspešne sa používa pri čistení dlhého peptidu.Prijatím nového zariadenia, zmiešaním viacerých čistiacich systémov, opakovanou separáciou a inými skúsenostnými metódami sa výrazne zlepšila úspešnosť čistenia dlhých peptidov.
Čas odoslania: 18. apríla 2023