Najviac náchylné na zlyhania a riešenia HPLC

Ako vysoko presný prístroj môže HPLC ľahko viesť k niektorým nepríjemným malým problémom, ak sa počas používania nepoužíva správnym spôsobom.Jedným z najbežnejších problémov je problém s kompresiou stĺpca.Ako rýchlo odstrániť poruchu chromatografu.Systém HPLC pozostáva hlavne zo zásobnej fľaše, čerpadla, injektora, kolóny, teplotnej komory kolóny, detektora a systému na spracovanie údajov.Pre celý systém sú stĺpiky, čerpadlá a detektory kľúčovými komponentmi a hlavnými miestami, ktoré sú náchylné na problémy.

Kľúčom k tlaku v kolóne je oblasť, ktorá si vyžaduje zvýšenú pozornosť pri použití HPLC.Stabilita tlaku v kolóne úzko súvisí s tvarom chromatografického píku, účinnosťou kolóny, účinnosťou separácie a retenčným časom.Stabilita tlaku v kolóne neznamená, že hodnota tlaku je stabilná na stabilnej hodnote, ale skôr to, že rozsah kolísania tlaku je medzi 345 kPa alebo 50 PSI (čo umožňuje použitie gradientovej elúcie, keď je tlak v kolóne stabilný a pomaly sa mení).Príliš vysoký alebo príliš nízky tlak je problémom s tlakom v kolóne.

Najviac náchylné na zlyhania a riešenia HPLC

1, vysoký tlak je najčastejším problémom pri použití HPLC.To znamená náhly nárast tlaku.Vo všeobecnosti existujú nasledujúce dôvody: (1) Vo všeobecnosti je to spôsobené zablokovaním prietokového kanála.V tomto bode by sme to mali preskúmať po častiach.a.Najprv odrežte prívod vákuovej pumpy.V tomto bode bola skúmavka PEEK naplnená kvapalinou, takže skúmavka PEEK bola menšia ako fľaša s rozpúšťadlom, aby sa zistilo, či kvapalina kvapká podľa vlastného uváženia.Ak kvapalina nekvapká alebo nekvapká pomaly, hlava filtra rozpúšťadla je zablokovaná.Ošetrenie: Namočte na pol hodiny do 30% kyseliny dusičnej a opláchnite ultračistou vodou.Ak kvapalina náhodne kvapká, hlava filtra rozpúšťadla je normálna a kontroluje sa;b.Otvorte preplachovací ventil tak, aby mobilná fáza neprechádzala cez kolónu a ak sa tlak výrazne nezníži, zablokuje sa biela hlava filtra.Ošetrenie: Filtrované biele bodky sa odstránili a sonikovali s 10% izopropanolom počas pol hodiny.Za predpokladu, že tlak klesne pod 100 PSI, filtrovaná biela hlava je normálna a kontroluje sa;c.Odstráňte výstupný koniec kolóny, ak tlak neklesne, kolóna je zablokovaná.Ošetrenie: Ak ide o zablokovanie tlmivou soľou, opláchnite 95%, kým nebude tlak normálny.Ak je prekážka spôsobená nejakým viac konzervovaným materiálom, mal by sa použiť silnejší prietok, než je súčasná mobilná fáza, aby sa rýchlo dosiahol normálny tlak.Ak sa dlhodobý čistiaci tlak nezníži podľa vyššie uvedeného spôsobu, možno vstup a výstup kolóny považovať naopak za pripojený k prístroju a kolónu vyčistiť mobilnou fázou.V tomto čase, ak sa tlak v kolóne stále nezníži, je možné iba vymeniť vstupnú dosku sita do kolóny, ale akonáhle prevádzka nie je dobrá, je ľahké viesť k zníženiu účinku kolóny, takže sa snažte použiť menej.Pri zložitých problémoch možno zvážiť výmenu stĺpca.

(2) Nesprávne nastavenie prietoku: Správny prietok je možné resetovať.

(3) Nesprávny pomer prietoku: index viskozity rôznych pomerov prietokov je odlišný a zodpovedajúci systémový tlak prietoku s vyššou viskozitou je tiež väčší.Ak je to možné, rozpúšťadlá s nižšou viskozitou možno nahradiť alebo znovu nastaviť a pripraviť.

(4) Posun nuly tlaku v systéme: nastavte nulu snímača hladiny kvapaliny.

2, tlak je príliš nízky (1) je zvyčajne spôsobený únikom systému.Čo robiť: Nájdite každé spojenie, najmä rozhranie na oboch koncoch kolóny, a utiahnite oblasť úniku.Odstráňte stĺpik a utiahnite alebo obložte fóliu PTFE primeranou silou.

(2) Plyn vstupuje do čerpadla, ale tlak je v tomto čase zvyčajne nestabilný, vysoký a nízky.Čo je vážnejšie, čerpadlo nebude schopné absorbovať tekutinu.Spôsob ošetrenia: otvorte čistiaci ventil a čistite pri prietoku 3~5ml/min.Ak nie, vzduchové bubliny boli nasávané na výfukovom ventile pomocou špeciálnej ihlovej trubice.

(3) Žiadny výtok mobilnej fázy: skontrolujte, či je v nádržke mobilná fáza, či je umývadlo ponorené v mobilnej fáze a či je čerpadlo v prevádzke.

(4) Referenčný ventil nie je zatvorený: Referenčný ventil je zatvorený po spomalení.Zvyčajne klesá na 0,1.~ 0,2 ml/min po zatvorení referenčného ventilu.

Zhrnutie:

V tomto článku sú analyzované iba bežné problémy v kvapalinovej chromatografii.Samozrejme, v našej praktickej aplikácii sa stretneme s viacerými inými problémami.Pri riešení porúch by sme sa mali riadiť nasledujúcimi zásadami: meniť vždy len jeden faktor, aby sme určili vzťah medzi hypotetickým faktorom a problémom;Vo všeobecnosti by sme pri výmene dielov pri odstraňovaní problémov mali venovať pozornosť vráteniu demontovaných neporušených dielov späť na miesto, aby sa predišlo plytvaniu;Vytvorenie dobrého záznamového návyku je kľúčom k úspechu pri riešení porúch.Na záver, pri používaní HPLC je dôležité venovať pozornosť predúprave vzorky a správnej prevádzke a údržbe zariadenia.