Fluorescenčný rezonančný prenos energie (FRET)
Fluorescenčný rezonančný prenos energie (FRET) je proces nežiarivého prenosu energie, pri ktorom sa energia donorového excitovaného stavu prenáša do akceptorového excitovaného stavu prostredníctvom interakcie medzimolekulových elektrických párov.Tento proces nezahŕňa fotóny, a preto nie je žiariaci.Výhodou tohto testu je, že je rýchly, citlivý a jednoduchý.
Farbivo použité vo FRET teste môže byť identické.Ale vo väčšine aplikácií sa v skutočnosti používajú rôzne farbivá.Stručne povedané, prenos svetelnej rezonančnej energie je prenos dvojice dipólov z donoru (farbivo 1) na akceptor (farbivo 2), keď je donorová skupina excitovaná.Vo všeobecnosti sa emisné spektrum donorovej fluorofórovej skupiny prekrýva s absorpčným spektrom akceptorovej skupiny."Keď je vzdialenosť medzi dvoma fluorofórmi primeraná (10 - 100 A), možno pozorovať prenos energie fluorofóru z darcu na akceptor."Spôsob prenosu energie závisí od chemickej štruktúry receptora:
1. Premieňa sa na molekulárne vibrácie, to znamená, že svetelné svetlo prenosu energie zmizne.(Receptor je zhášač svetla)
2. Emisia je intenzívnejšia ako samotný receptor, výsledkom čoho je červený posun v sekundárnom fluorescenčnom spektre.“(Receptory sú svetelné žiariče).
Donorová skupina (EDANS) a akceptorový gén (DABCYL) sú jednotne spojené s prirodzeným substrátom HIV proteázy, a keď substrát nie je odpojený, DABCYL môže stlmiť EDANS a potom sa stane nedetegovateľným pre fluór.Po odpojení proteázy HIV-1 už nie je EDANS utlmený pomocou DABCYL a následne môžu byť detegované EDANS luciferázy.Dostupnosť inhibítorov proteázy môže byť monitorovaná zmenami intenzity fluorescencie EDANS.
FRET peptidy sú vhodné nástroje na štúdium peptidázovej nešpecifickosti.Pretože jeho reakčný proces môže byť nepretržite monitorovaný, poskytuje pohodlný spôsob detekcie enzýmovej aktivity.Lesk produkovaný po hydrolýze peptidových väzieb donorom/akceptorom poskytuje mieru aktivity enzýmu pri nanomolárnych koncentráciách.Keď je FRET peptid neporušený, vykazuje náhle zmiznutie vnútorného záblesku, ale keď sa preruší akákoľvek peptidová väzba naproti donor/akceptor, uvoľní záblesk, ktorý možno nepretržite detegovať a aktivitu enzýmu potom kvantifikovať.
Čas odoslania: 14. augusta 2023