Rekombinantné proteínové antigény majú často niekoľko rôznych epitopov, z ktorých niektoré sú sekvenčné epitopy a niektoré sú štrukturálne epitopy.Polyklonálne protilátky získané imunizáciou zvierat denaturovanými antigénmi sú zmesou protilátok špecifických pre jednotlivé epitopy a možno ich použiť vo všeobecnosti na detekciu prirodzených štruktúr alebo denaturovaných cieľových proteínov.Vedľajšou výhodou použitia denaturovaných proteínov ako imunogénov je, že denaturované proteíny majú tendenciu byť viac imunogénne a môžu stimulovať silnú imunitnú odpoveď u zvierat.
Expresný systém Escherichia coli sa zvyčajne vyberá na antigénne účely, pretože je to najnákladnejší systém z hľadiska času a peňazí.Aby sa zlepšila možnosť expresie cieľového proteínu a pohodlie purifikácie, niekedy sa exprimuje iba malý fragment cieľového proteínu, ako je špecifická doména.
Trojrozmerná štruktúra proteínov
Špecifická doména proteínu
Ak je účelom prípravy protilátky výhradne detekcia wb, je ekonomické a rýchle použiť ako antigén syntetický malý peptid, existuje však riziko slabej imunogenicity alebo neregenity v dôsledku nevhodného výberu segmentu peptidu.Pretože príprava protilátky vyžaduje dlhé obdobie, často sa vyberú dva alebo tri rôzne peptidové segmenty na prípravu protilátok s použitím polypeptidového antigénu, aby sa zabezpečila miera úspechu experimentu.
Vyžaduje sa, aby čistota polypeptidového antigénu na imunizáciu bola vyššia ako 80 %.Hoci vyššou čistotou možno teoreticky získať protilátky s lepšou špecifickosťou, v praxi zvieratá vždy produkujú veľké množstvo nešpecifických protilátok, čím sa maskujú výhody čistoty antigénu.
Okrem toho príprava protilátok z malých peptidov musí byť zosieťovaná na vhodný nosičový antigén, aby sa zvýšila jeho imunogenicita.Dva bežné antigénne nosiče sú KLH a BSA.
Čas odoslania: 23. marca 2023